Détection moléculaire du Mycobacterium leprae par PCR en temps réel
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Détails de la référence
Détection par PCR en temps réel des espèces du Mycobacterium incluant M. leprae dans des échantillons cliniques au moyen de diverses cibles moléculaires.
- Lèpre
Afin de déterminer si un échantillon clinique peut être soumis à ces tests, veuillez consulter le chef des diagnostics du CNRM. Veuillez noter le volume et la qualité de l’échantillon aux fins d’analyse.
– Pour le liquide céphalorachidien (LCR) ou les autres envois de liquides : Idéalement 5 ml, ou un échantillon d’au moins 1 ml.
– Pour les tissus : Des échantillons frais et stériles, notamment des échantillons de biopsie frais, sont préférables. L’échantillon doit être positif à l’égard de la loque américaine. Des échantillons congelés peuvent être acceptés à condition qu’ils aient été uniquement manipulés dans un environnement aseptisé.
– Pour l’ADN : Un minimum de 100 ng d’ADN est requis. L’ADN doit être mis en suspension dans un volume minimal de 25 µl de solution tampon ou d’eau de qualité moléculaire, et il faut quantifier l’ADN dans les échantillons.
Échantillons cliniques positifs pour des bacilles acidorésistants, comme les tissus frais, le LCR ou les sédiments d’échantillons décontaminés. Il n’est pas recommandé de mener des essais avec des tissus fixés au formol en raison de la dégradation de l’ADN.
Expédier les échantillons cliniques (p. ex. expectorations, tissus frais) sur de la glace pour livraison le lendemain, et avant le mercredi de chaque semaine pour s’assurer qu’elles soient livrées au plus tard le vendredi. Le matériel décongelé peut être expédié sur de la glace sèche, pourvu que les procédures relatives au transport des matières dangereuses soient respectées. Pour obtenir de plus amples renseignements, consulter le CNRM.
L’expédition des prélèvements doit être confiée à une personne détenant un certificat de formation TMD, conformément au Règlement sur le TMD. Pour plus d’information sur la catégorisation des matières à des fins d’expédition, veuillez consulter la partie 2 de l’appendice 3 du règlement ou la section 3.6.2 du règlement de l’IATA sur les produits dangereux.
Veuillez consulter le CNRM avant de soumettre un échantillon en vue de la détection du M. leprae. Veuillez noter les antécédents de voyage du patient.
Un avis d’envoi d’échantillon doit être transmis par courriel ou par télécopieur avant l’expédition des isolats. Les échantillons doivent être expédiés à l’attention de : Melissa Rabb, chef des Services de référence et de diagnostic, 204-789-6081/204-789-6038. La demande d’analyse destinée au CNRM doit être remplie et signée par le superviseur ou la personne désignée. Elle doit indiquer les renseignements suivants : identificateur du laboratoire expéditeur; sexe, date de naissance, antécédents cliniques et antécédents de voyage du patient; source de l’échantillon; résultats de microscopie, le cas échéant; et toute autre information pertinente sur l’échantillon soumis. Veuillez demander la détection de M. leprae dans la section sur l’identification et la détection de la demande d’analyse destinée au CNRM.
Les échantillons peuvent être rejetés si leur volume est insuffisant ou si le motif et les documents pertinents sont incomplets ou manquants.
En ce qui concerne M. leprae, la PCR en temps réel sera utilisée pour la détection de la région ITS et de la séquence répétitive RLEP unique.
10 jours civils.
- Truman RW, Andrews PK, Robbins NY, Adams LB, Krahenbuhl JL, Gillis TP. Enumeration of Mycobacterium leprae using real-time PCR. PLoS Negl Trop Dis. 2008;2: e328. doi:10.1371/journal.pntd.0000328.