Détection moléculaire par PCR
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Détection moléculaire de Haemophilus ducreyi (chancre mou) par PCR.
- Chancre mou
L'échantillon de choix pour le diagnostic du chancre mou est un prélèvement par écouvillon fait à la base de l'ulcère génital. Un échantillon du bubon prélevé par aspiration est également acceptable.
Les échantillons qui ne constituent pas le bon type d’échantillon, dont le volume est insuffisant, ou qui ne sont pas accompagnés des renseignements pertinents sur le patient peuvent être rejetés.
Utilisez des écouvillons en Dacron ou en coton pour prélever les échantillons sur l’ulcère. La meilleure façon de prélever l’échantillon consiste à nettoyer la région en la rinçant à l’aide d’une solution saline physiologique stérile, puis à prélever les échantillons à la base de l’ulcère à l’aide d’un écouvillon en Dacron ou en coton. Vous pouvez également utiliser une seringue et une aiguille pour aspirer du pus du bubon à travers le tissu normal.
Vous pouvez expédier les écouvillons à l'état sec OU les placer dans des tubes contenant 1 ml de milieu de transport universel (Copan International). Les échantillons de bubon prélevés par aspiration doivent être placés dans des tubes stériles et expédiés à l'état congelé. Les écouvillons doivent être gardés congelés jusqu'à ce qu'ils soient expédiés aux fins d'analyse.
L’expédition des prélèvements doit être confiée à une personne détenant un certificat de formation TMD, conformément au Règlement sur le TMD. Pour plus d’information sur la catégorisation des matières à des fins d’expédition, veuillez consulter la partie 2 de l’appendice 3 du règlement ou la section 3.6.2 du règlement de l’IATA sur les produits dangereux.
H. ducreyi est l’agent causal du chancre mou, une ITS qui se caractérise par un ulcère génital nécrosant lequel peut être associé à la formation d’une lymphadénite inguinale («bubon»). Le chancre mou est endémique dans le Sud-est de l’Asie et en Afrique, mais survient occasionnellement dans les pays industrialisés, habituellement chez des individus qui ont voyagé dans ces régions endémiques ou dans des éclosions urbaines localisées impliquant souvent l’industrie du sexe. Les individus immunodéprimés (par ex. positif pour le VIH) peuvent être plus à risque d’être infectés par H. ducreyi.
Formulaire de requête d’analyse de l’Unité des streptocoques et des ITS – Indiquer clairement l’analyse du microorganisme qui doit être effectuée sur le formulaire de requête. Joindre à la requête tous les renseignements pertinents sur le contexte clinique et les analyses effectuées.
Les échantillons en double ne devraient pas être soumis sans consentement préalable. Ils pourraient ne pas être traités. Les isolats prélevés chez un même patient à trois semaines d’intervalle sont considérés comme des échantillons en double.
À l’aide d’une trousse disponible commercialement, on extrait d’abord l’ADN de tous les échantillons de H. ducreyi reçus au LNM pour analyse par PCR. Les résultats sont fondés sur des PCR spécifiques de H. ducreyi ciblant le gène hautement conservé codant l’ARNr 16S et le gène codant l’« hémolysine » (hhdA) spécifique de H. ducreyi. Un échantillon est considéré comme positif pour la présence de H. ducreyi si les résultats de l’une ou l’autre des PCR spécifiques de H. ducreyi sont positifs. L'échantillon est également testé pour la RNase-P pour s'assurer que l'extraction d'ADN a réussi.
Un résultat positif à l’épreuve de PCR faisant ressortir la présence d’une séquence cible spécifique à une bactérie pathogène d’intérêt indique sa présence dans l’échantillon soumis.
Un résultat négatif à l’épreuve de PCR indique l’absence d’ADN bactérien détectable dans l’échantillon, mais ne permet pas d’écarter l’infection, car des résultats faussement négatifs peuvent être causés par : l’inhibition des réactions de PCR, la variabilité des séquences auxquelles sont fixées les amorces et les sondes ciblées, et la présence d’ADN bactérien à des quantités inférieures à la limite de détection de l’essai.
Comme c’est le cas pour tous les tests de laboratoire, les résultats d’analyse devraient être interprétés en tenant compte de l’ensemble des données cliniques et des données de laboratoire existantes.
14 jours civils. Les échantillons urgents ou associés à une éclosion seront considérés comme prioritaires et traités le plus tôt possible.
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